Analisis del PCR en VIH/SIDA
TEMA: Detección de anticuerpos IgA y PCR como primeras opciones en el diagnóstico de infección perinatal por el VIH-1
OBJETIVO: Evaluar la sensibilidad y especificidad de la reacción en cadena de la polimerasa y de las pruebas de ELISA e inmunoblot para anticuerpos IgA específicos, como únicos métodos en el diagnóstico de infección perinatal del VIH-1.
MUESTRA: 90 muestras de sangre de niños infectados y 153 de no infectados
ÁCIDO NUCLEICO: ADN genómico
GEN: gag
TIPO DE PCR: Se estandarizaron ensayos de ELISA e inmunoblot y PCR
VIZUALIZACIÓN: Electroforesis
ENZIMA: ADN Polimerasa
GEN CORTADO: SK462 que van del nucleótido 1 358 al 1 387 y SK431 que comprende del nucleótido 1 473 al 1 497 para definir una secuencia de 142 pares de bases de una región altamente conservada del gen gag.
PASOS:
La lisis celular se realizó calentando a 55 °C /45 minutos
inactivación de la proteinasa K a 96 °C/10 minutos
La amplificación se llevó a cabo en un termociclador Perkin Elmer 2 400 bajo las siguientes condiciones: tres ciclos de 10 seg a 94 °C, 10 seg a 55 °C, 30 seg a 72 °C seguidos de 32 ciclos de 10 seg a 94 °C, 60 °C y 72 °C, respectivamente. La amplificación se completó con una extensión final de 72 °C/5 min.
RESULTADOS: La sensibilidad y especificidad de la prueba de ELISA fueron 61.1 y 90.8%, respectivamente. En el inmunoblot encontramos 82.2 y 95.4%, respectivamente, en tanto que la reacción en cadena de la polimerasa demostró tener sensibilidad de 98.3% y especificidad de 100% con sólo un falso negativo.
Referancias:
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